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等度洗脫VS梯度洗脫,如何選擇?

2023-05-23

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哈嘍,有液相實驗經(jīng)驗的小伙伴應(yīng)該都清楚,在考察液相色譜分離條件時,最重要的參數(shù)就是洗脫條件。其中洗脫條件又分為等度洗脫和梯度洗脫。下面小編就簡單帶大家來看下這兩種洗脫方式的優(yōu)點和缺點,以及他們的適用范圍。

01 等度洗脫

是指在樣品組分的分析周期中,流動相的組成比例和流速恒定不變的洗脫方式。

優(yōu)點

1、對于等度洗脫而言,由于方法運行時,流動相的比例不發(fā)生變化,所以它對儀器的要求不高,只需要一個單元泵就可以運行方法。

2、由于等度洗脫條件單一,所以比較容易用來摸索方法設(shè)置,例如改變流動相比例,改變柱溫等條件。

3、由于等度洗脫每次運行時的流動相比例相同,所以相同方法運行多個樣品時,樣品之間不需要設(shè)置平衡時間來讓系統(tǒng)恢復(fù)到所需的流動相比例。

缺點

1、越往后出峰的組分色譜峰越寬。

2、并且大多數(shù)等度洗脫的方法分析時間較長。

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02 梯度洗脫

是指在同一個分析周期中,按一定程序不斷改變流動相的濃度配比的洗脫方式。

優(yōu)點

1、梯度洗脫能夠規(guī)避掉等度洗脫的問題,例如梯度洗脫的樣品峰,無論先出峰還是后出峰的組分,它們的峰形基本都能保證尖銳對稱。

2、由于梯度洗脫通常設(shè)置的流動相比例是讓洗脫強度越來越強,這樣能保證在較短的時間內(nèi),讓樣品中強保留組分也能被洗脫出來。

缺點

1、如果在運用梯度洗脫時,流動相比例變化過快,可能產(chǎn)生鬼峰影響檢測。

2、梯度洗脫對儀器的配置要求較高,通常需要配置四元泵或者二元泵。

3、梯度洗脫每次運行樣品之間,需要設(shè)置一定的平衡時間,來讓系統(tǒng)中流動相的比例到達(dá)初始流動相比例。

4、梯度洗脫的方法設(shè)置復(fù)雜,例如影響分離的:有初始流動相比例、流動相的梯度變化、結(jié)束流動相比例、柱溫箱溫度等,所以方法的開發(fā)和優(yōu)化會較為復(fù)雜。

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03 適用范圍

用梯度洗脫還是等度洗脫,主要看雜質(zhì)與雜質(zhì)、主峰、溶劑峰的分離的情況。同一物質(zhì)有梯度洗脫和等度洗脫兩種條件時,梯度洗脫的認(rèn)可度較高。下面就是更適合梯度洗脫的適用情況。

1、多組分樣品的極性范圍大,用等度無法全部洗脫的樣品。

第一種情況:雜質(zhì)和主成分極性相差很大,長時間雜質(zhì)未能洗脫出來,就必須考慮用梯度。

第二種情況:雜質(zhì)極性比主峰的大,等度時要想主峰時間合適雜質(zhì)全堆在前邊,雜質(zhì)分開主峰又出峰太晚,這種情況也得考慮梯度洗脫。

2、大分子量樣品(肽、蛋白質(zhì)、合成聚合物等)一般采用梯度洗脫分離會更好,尤其是反相條件。這類樣品,往往對有機相的量特別敏感,有機相的微小變化就會使樣品的保留時間發(fā)生很大的變化,導(dǎo)致用等度條件檢測時,無法使保留時間控制在一個穩(wěn)定合適的范圍內(nèi)。

3、改善峰型。

4、目標(biāo)峰出峰后,短時間內(nèi)提高有機相比例,洗脫強保留干擾雜質(zhì)。

5、用等度洗脫無法達(dá)到分離的情況。有些物質(zhì),特別是結(jié)構(gòu)相近的物質(zhì),等度條件下無法達(dá)到分離,而采用梯度模式,因組分在有機相變化的選擇性差異,可以達(dá)到分離,這種情況下就需要采用梯度條件進(jìn)行測試。

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