固相萃取，簡(jiǎn)稱SPE，是近年發(fā)展起來(lái)一種樣品預(yù)處理技術(shù)，由液固萃取柱和液相色譜技術(shù)相結(jié)合發(fā)展而來(lái)，主要用于樣品的分離、純化和濃縮，與傳統(tǒng)的液液萃取法相比較可以提高分析物的回收率，更有效的將分析物與干擾組分分離，減少樣品預(yù)處理過(guò)程，操作簡(jiǎn)單、省時(shí)、省力。廣泛應(yīng)用在醫(yī)藥、食品、環(huán)境、商檢、化工等領(lǐng)域。

在實(shí)驗(yàn)當(dāng)中，使用SPE的過(guò)程中常常會(huì)遇到各種各樣的問(wèn)題，如回收率、流速、極性等問(wèn)題。而具體問(wèn)題需要具體分析，因?yàn)槊鎸?duì)不同實(shí)驗(yàn)，各個(gè)實(shí)驗(yàn)室的實(shí)驗(yàn)技術(shù)、環(huán)境及時(shí)間都是不一樣的，這也導(dǎo)致問(wèn)題原因也各不相同。

SPE的回收率偏低是更常見的問(wèn)題，更常見的原因可能就是目標(biāo)物沒(méi)有被小柱填料保留，或者目標(biāo)物沒(méi)有完全洗脫。

原因1：SPE柱的極性不合適。

解決方法：選擇其他低極性或者選擇性弱的SPE柱。

原因2：洗脫溶劑不夠強(qiáng)，無(wú)法將目標(biāo)物化合物從SPE柱上洗脫。

解決方法：改變洗脫溶劑的pH，以增加其對(duì)目標(biāo)化合物的親和力。

原因3：洗脫溶劑體積太小。

解決方法：增加溶劑體積。

在同一批SPE產(chǎn)品中，SPE的流速可能會(huì)存在快慢不一的情況，而SPE流速過(guò)快不利于目標(biāo)化合物在填料上的保留，也會(huì)極大影響溶劑與目標(biāo)化合物或者填料的相互作用，從而影響保留或者洗脫過(guò)程。過(guò)慢則會(huì)增加實(shí)驗(yàn)時(shí)間。

原因1：填料量、緊密度等小柱因素會(huì)影響流速的快慢。

解決方法：可借助固相萃取裝置或者泵流操作架等進(jìn)行流速控制，流速低于5mL/min時(shí)結(jié)果較為穩(wěn)定，部分實(shí)驗(yàn)需更慢。流速較慢則可施加外力增速。

原因2：樣品存在過(guò)多的顆粒，小柱堵塞，導(dǎo)致流速降低。

解決方法：對(duì)樣品進(jìn)行過(guò)濾或者離心。

原因3：樣品溶液粘度太大。

解決方法：可用溶劑對(duì)樣品進(jìn)行稀釋。

填料存在更大吸附量上限，當(dāng)超過(guò)更大吸附量上限時(shí)會(huì)造成小柱吸附超載，從而導(dǎo)致目標(biāo)物流失。同時(shí)在未規(guī)定SPE規(guī)格的情況下，也可根據(jù)吸附容量去計(jì)算合適的填料規(guī)格。

1.硅膠基質(zhì)：柱容量一般不超過(guò)SPE填料質(zhì)量的5%，例如100mg/mL的C18小柱可以保留5mg的化合物。

2.聚合物基質(zhì)：柱容量是硅膠基質(zhì)吸附劑的3倍，一般不超過(guò)SPE填料質(zhì)量的15%，例如100mg/mL的BRP小柱可以保留15mg的化合物。

3.離子交換吸附劑：交換容量為0.25-1mmol/g，1mmol/g表示1g吸附劑能吸附1mmol的一價(jià)帶電物質(zhì)。

在使用固相萃取小柱進(jìn)行樣品前處理時(shí)，若出現(xiàn)萃取效果重現(xiàn)性差，可能的原因及改進(jìn)辦法如下：

原因1：上樣前柱床干涸。

解決辦法：重新活化并平衡SPE小柱。

原因2：過(guò)柱流速過(guò)快。

解決辦法：降低流速。

原因3：清洗溶劑洗脫能力太強(qiáng)。

解決辦法：先讓洗脫液滲入小柱，然后再對(duì)小柱進(jìn)行抽真空或者加壓，并控制流速1-2mL/min。

原因4：超出小柱的載樣能力。

解決辦法：減小載樣量，或者換用填料規(guī)格更大的SPE小柱。

在使用SPE的過(guò)程中，可能會(huì)因?yàn)樾≈?、溶劑、?shí)驗(yàn)技術(shù)等的選擇，導(dǎo)致更終的凈化結(jié)果達(dá)不到預(yù)期效果。

原因1：凈化模式不適用。

解決辦法：可優(yōu)化凈化模式，通常而言采用保留目標(biāo)化合物的模式會(huì)比保留雜質(zhì)的模式凈化效果好，如果正在分析的項(xiàng)目為某一種或某一類化合物分析，可以采用保留目標(biāo)化合物的凈化模式。如果不止一種SPE柱可用于目標(biāo)化合物的凈化時(shí)，也可挑選選擇性好的吸附劑，一般離子交換>正相>反相。

原因2：淋洗液或者洗脫液不適用。

解決辦法：根據(jù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化淋洗液或者洗脫液。

原因3：SPE小柱當(dāng)中存在少量干擾物。

解決辦法：對(duì)SPE小柱進(jìn)行合理處理，將SPE柱有效活化。