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梯度洗脫在反相色譜中的作用(下篇)

2023-01-10

梯度洗脫可用于處理不能以等度洗脫分離的樣品,而更常見的使用梯度的因素是多成分保留能力不同,無法在等度洗脫中全洗脫出來,或以等度方式無法達(dá)到滿意的分離效果。總結(jié)下來,以下幾種情況,可以采用梯度洗脫:

1、多組分樣品的極性范圍大,用等度無法全部洗脫的樣品;

2、大分子樣品;

3、改善峰峰型;

4、目標(biāo)峰出峰后,短時(shí)間內(nèi)提高有機(jī)相比例,洗脫強(qiáng)保留干擾雜質(zhì);

5、用等度洗脫無法達(dá)到分離的情況。

#01、目標(biāo)峰出峰后,短時(shí)間內(nèi)提高

有機(jī)相比例,洗脫強(qiáng)保留干擾雜質(zhì)

在檢測復(fù)雜成分的樣品時(shí),往往存在些強(qiáng)保留物質(zhì),采用等度,無法把強(qiáng)保留的雜質(zhì)洗脫下來,一針哪怕采集再久,也會(huì)有未知雜質(zhì)干擾后面進(jìn)樣的效果,這種情況下,可以增加梯度洗脫,使強(qiáng)保留成分在梯度上洗脫出來的方式來解決。

示例:

微信截圖_20230110150556.png

30分鐘開始,增加梯度洗脫,

以洗去強(qiáng)保留雜質(zhì),連續(xù)進(jìn)樣,均無干擾

由上面三張圖可見,此中藥,在采用等度洗脫時(shí),因有強(qiáng)保留未知雜質(zhì),連續(xù)進(jìn)樣,會(huì)在后面的進(jìn)樣出峰,干擾檢測。在待測成分出峰后,增加梯度,提高有機(jī)相比例,強(qiáng)保留物質(zhì)在當(dāng)針就洗脫下來,連續(xù)進(jìn)樣確認(rèn),效果能完全重現(xiàn),后面進(jìn)樣不會(huì)出現(xiàn)未知干擾峰影響。

#02、用等度洗脫無法達(dá)到分離的情況

有些物質(zhì),特別是結(jié)構(gòu)相近的物質(zhì),等度條件下無法達(dá)到分離,而采用梯度模式,因組分在有機(jī)相變化的選擇性差異,可以達(dá)到分離,這種情況下就需要采用梯度條件進(jìn)行測試。

示例:

微信截圖_20230110150605.png

微信截圖_20230110150703.png

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