国产在线观看无码免费视频_亚洲成äv人片天堂网无码_国产精品自在线拍国产电影_亚洲午夜国产片在线观看_国产一级毛片在线视频

提示

首頁(yè) > 新聞動(dòng)態(tài) > 不管你的極性有多強(qiáng)!我都會(huì)牢牢抓住你

不管你的極性有多強(qiáng)!我都會(huì)牢牢抓住你

2020-05-09


1588993725883611.jpg

反相色譜柱一般是由硅膠,有機(jī)/無(wú)機(jī)雜化硅膠或者聚合物作為基質(zhì), C18作為鍵合相。典型反相色譜柱基于分析物與烷烴鏈之間的疏水相互作用,根據(jù)樣品組分的極性大小的差異而實(shí)現(xiàn)樣品組分的分離。該分離模式有賴于色譜柱多孔基質(zhì)內(nèi)的C18鍵合相的自由伸展構(gòu)象。

對(duì)于有機(jī)酸/堿類化合物,多羥基化合物以及偶氮類等極性化合物,由于含有羧基,氨基,羥基等可解離部分,其極性較大而不適合以經(jīng)典反相C18類鍵合相進(jìn)行分離。其典型表現(xiàn)為容量因子K過(guò)小,導(dǎo)致該類化合物在死時(shí)間附近出峰。

1588993761855262.png

對(duì)于這些極性化合物,雖然我們可以在做梯度分析方法開(kāi)發(fā)時(shí),選擇降低起始有機(jī)相的比例,甚至以純水相作為起始流動(dòng)相來(lái)增大該類化合物的容量因子。但化合物色譜峰峰形會(huì)出現(xiàn)峰展寬以及更嚴(yán)重的C18色譜柱固定相孔內(nèi)去濕現(xiàn)象(Dewetting);在停泵并重新恢復(fù)流速后,會(huì)出現(xiàn)化合物保留時(shí)間減少,色譜峰峰形異常(峰分叉、峰拖尾)等方法重現(xiàn)性問(wèn)題,尤其以拖尾更為常見(jiàn)。

對(duì)于這些極性化合物該如何得到較好的保留,在這里且聽(tīng)小編慢慢道來(lái)。

一、孔內(nèi)去濕現(xiàn)象(Dewetting)

反相HPLC一般以水作為弱洗脫相,以甲醇、乙腈等有機(jī)試劑作為強(qiáng)洗脫相。在運(yùn)行梯度時(shí),有機(jī)相的比例一般可在5%-1OO%范圍內(nèi)變化,以適應(yīng)不同樣品的分離需求。對(duì)于極性化合物來(lái)說(shuō),在典型的C18色譜柱上,即使有機(jī)相比例為5%亦不能夠做到有效保留。在進(jìn)一步降低有機(jī)相比例(以至為零),就會(huì)引起色譜柱多孔內(nèi)表面以及固定鍵合相的去濕現(xiàn)象(Dewetting)。

微信圖片_20200509111029.png

圖1 反相C18鍵合相上孔內(nèi)去濕現(xiàn)象

如圖1A所示,5%及其以上有機(jī)相時(shí),流動(dòng)相可輕易浸入固定相基質(zhì)多孔內(nèi),浸濕內(nèi)表面以及C18烷烴鏈,且C18鏈呈自由伸展構(gòu)象,可很好的與樣品組分的疏水部分發(fā)生相互作用實(shí)現(xiàn)適當(dāng)?shù)谋A簟.?dāng)使用1OO%水相的時(shí)候,如圖1B,雖然可以選擇增大色譜柱前段壓力的方式,使得純水相浸入基質(zhì)多孔內(nèi)部,卻無(wú)法實(shí)現(xiàn)對(duì)內(nèi)表面以及C18鏈的有效浸濕,此外由于色譜柱沿流動(dòng)相流動(dòng)方向上的壓力降現(xiàn)象(如圖2),使得整個(gè)色譜柱的浸濕狀態(tài)存在很大差異。當(dāng)柱前壓減小時(shí)(如停泵),由于多孔內(nèi)部的強(qiáng)疏水性,純水相則被“排出”孔隙,導(dǎo)致去濕現(xiàn)象發(fā)生,如圖1C所示。

微信圖片_20200509111103.png

圖2 反相色譜柱壓力降

C18鏈在孔內(nèi)去濕現(xiàn)象發(fā)生前后,在多孔內(nèi)的構(gòu)象如下圖3所示。在典型反相HPLC流動(dòng)相下(水相≤95%),C18鏈在多孔內(nèi)呈現(xiàn)自由伸展構(gòu)象;在1OO%水相下, C18鏈則相互之間“交聯(lián)”并更大程度的靠近內(nèi)表面,形成疏水屏蔽層,失去與待分離組分疏水部分相互作用的能力,導(dǎo)致保留時(shí)間變短。

微信圖片_20200509111116.jpg

圖3 C18鏈在孔內(nèi)去濕現(xiàn)象發(fā)生前后

二、極性化合物分離挑戰(zhàn)

以典型的反相C18色譜柱對(duì)極性化合物進(jìn)行分離時(shí),往往會(huì)出現(xiàn)保留時(shí)間過(guò)短,色譜峰峰形拖尾問(wèn)題。保留時(shí)間過(guò)短往往是由于化合物本身或者在體系中解離之后極性過(guò)大,油-水分配系數(shù)過(guò)小而不能與疏水選擇性基團(tuán)發(fā)生足夠的疏水相互作用,進(jìn)而隨起始流動(dòng)相一起直接流出色譜柱。

如有機(jī)酸類化合物在流動(dòng)相pH大于其pKa時(shí)發(fā)生解離而本身帶負(fù)電,可與硅膠基質(zhì)上殘留的金屬離子發(fā)生靜電相互作用;有機(jī)堿類化合物在流動(dòng)相pH小于其pKa時(shí)發(fā)生解離而本身帶正電,與弱酸性的硅羥基產(chǎn)生靜電相互作用;多羥基,羥基-胺類有機(jī)化合物以及未解離有機(jī)酸堿類化合物與硅羥基之間的氫鍵相互作用。以上三種“二級(jí)保留”相互作用,均會(huì)造成有機(jī)極性化合物的拖尾。此外,溶解極性化合物的溶劑選擇不合適的話,也會(huì)導(dǎo)致色譜峰拖尾現(xiàn)象。典型極性化合物如下圖4所示。

微信圖片_20200509111135.png

圖4 極性化合物

因此,極性化合物在反相色譜柱上做分析方法開(kāi)發(fā)時(shí)主要面臨以下幾方面的問(wèn)題:

1. 如何使得極性化合物具有適當(dāng)?shù)谋A魰r(shí)間;

2. 如何避免在使用高水比例甚至純水相洗脫時(shí)出現(xiàn)的孔內(nèi)去濕(相塌陷)問(wèn)題;

3. 如何更大可能地減小色譜峰拖尾因子,獲得優(yōu)異的峰形;

三、極性化合物分離策略

利用純水相洗脫方式對(duì)極性化合物進(jìn)行分離,面臨色譜柱固定相孔內(nèi)去濕(相塌陷)問(wèn)題,但可通過(guò)對(duì)經(jīng)典反相C18鍵合相進(jìn)行改性,或者使用其他鍵合相以及使用Hilic分離模式,更大程度地減小或避免該現(xiàn)象的發(fā)生,同時(shí)做到對(duì)極性化合物有效保留。

色譜柱孔內(nèi)去濕現(xiàn)象的發(fā)生以及程度的大小與色譜填料顆??讖降拇笮?,多孔內(nèi)表面鍵合相的鍵合密度,所用烷烴鏈長(zhǎng)度、基質(zhì)表面裸露的硅羥基數(shù)量以及封端類型有關(guān)。

3.1  非封端短鏈烷烴鍵合固定相

這種類型的反相色譜柱主要特點(diǎn)有兩個(gè):硅膠基質(zhì)表面裸露的硅羥基不封端以及鍵合固定相鏈長(zhǎng)度小于C8。由于固定相烷烴鏈長(zhǎng)度遠(yuǎn)小于C18,多孔內(nèi)疏水性變小,加之表面硅羥基不封端使得純水相與多孔接觸角變小,與典型C18相比,發(fā)生孔內(nèi)去濕現(xiàn)象的可能性大大減小。與此同時(shí),該種類型的色譜柱由于鍵合烷烴鏈長(zhǎng)度較小,在對(duì)樣品組分分離的時(shí)候,吸附作用以及硅羥基氫鍵相互作用占主要地位。例如月旭Ultimate?XB-C1。

3.2  極性封端與極性增強(qiáng)型固定相

該型色譜柱采用極性或者親水性的封端試劑對(duì)表面裸露的硅羥基進(jìn)行封端,C18的鍵合密度較低,這種改性方式與典型的C18色譜柱相比,增大了內(nèi)表面的水浸潤(rùn)性且較低的鍵合密度也使得孔內(nèi)疏水性相對(duì)減小,因而允許使用1OO%水相。例如月旭Ultimate?ALK-C18。

3.3  極性內(nèi)嵌烷基固定相

這種類型的色譜柱在長(zhǎng)鏈烷基靠近硅膠內(nèi)表面的一端,內(nèi)嵌入甲酸酯基類、脲或者酰胺基以及硫酰胺基等極性改性官能團(tuán)。由于極性內(nèi)嵌,使得整個(gè)鍵合相的親水性增強(qiáng),多孔內(nèi)疏水性減小,在1OO%水相條件下,極性內(nèi)嵌烷烴鏈依然保持自由伸展構(gòu)象。此外,內(nèi)嵌極性基團(tuán)對(duì)表面裸露的硅羥基亦有一定的屏蔽作用,減小了極性化合物特別是堿性化合物的拖尾因子,色譜峰峰形更加對(duì)稱。例如月旭Ultimate?Polar-RP。

四、常用耐1OO%水相色譜柱

月旭常用的耐1OO%水相的反相色譜柱有:

1588993978838393.png

典型反相HPLC色譜柱在使用1OO%水相對(duì)極性化合物進(jìn)行分離分析時(shí),易出現(xiàn)硅膠多孔內(nèi)去濕(相塌陷)現(xiàn)象,導(dǎo)致化合物保留時(shí)間減小,方法重現(xiàn)性出現(xiàn)問(wèn)題。通過(guò)對(duì)色譜柱硅膠表面或者烷烴鏈改性,如增加內(nèi)表面極性大小以及烷烴鏈內(nèi)嵌極性官能團(tuán),使得多孔內(nèi)表面及固定相被水浸潤(rùn)能力增加,而減少或避免孔內(nèi)去濕現(xiàn)象的發(fā)生。此外,也可通過(guò)調(diào)整HPLC操作方式以及改變色譜條件,對(duì)極性化合物的保留因子以及峰形進(jìn)行調(diào)整。

小伙伴們想了解更多有關(guān)極性化合物保留的相關(guān)信息,請(qǐng)咨詢?cè)滦窨萍籍?dāng)?shù)劁N售人員或撥打400-810-6969垂詢。

国产在线观看无码免费视频_亚洲成äv人片天堂网无码_国产精品自在线拍国产电影_亚洲午夜国产片在线观看_国产一级毛片在线视频